干血斑基因组DNA提取试剂盒0.1-1ML

　　产品及特点

　　本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取干血斑 中的基因组 DNA。所提 DNA 分子纯度高，可直接进行 PCR、Real-Time PCR 和杂交等相 关分子生物学实验，整个过程安全可靠、简单快速。

　　它具有下列特点：

　　1. 简便快捷：操作快速方便；

　　2. 稳定可靠：得率高，纯度好，重复性强。

　　使用方法

　　自备试剂

　　无水乙醇、RNase A（可选）。

　　样本采集、保存和运送

　　1. 样本：按照滤纸干血斑采集方法进行采集。

　　2. 样本保存：经上述采集的待测样本可立即用于处理，或在密封，干燥（湿度低于30%）， 2-8°C 条件下保存（此条件下可保存 5 年）。样本运送时应将滤纸干血斑密封，采用泡 沫箱加冰运输。

　　提取步骤

　　（注 意：使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签）

　　1. 取三片 3×3 mm 的干血斑样品到 1.5 ml 的离心管（自备）中，加入 200 ul Buffer GTL，

　　20 ul 蛋白酶 K ，混合均匀，56℃恒温震荡器中，900 rpm 恒温震荡 1 h。

　　2. 加入 200 ul Buffer GL 涡旋混匀，70℃恒温震荡器中，900 rpm 恒温震荡 10 min。

　　3. 加入 200 ul 无水乙醇，涡旋震荡充分混匀，短暂离心收集管壁上的液体。

　　4. 将一吸附柱放入收集管中，将液体全部转入到吸附柱中，10000 rpm离心30 s ，弃滤 液。

　　5. 向吸附柱中加入 500 ul Buffer W1 ，10000 rpm 离心 30 s ，弃滤液。

　　（注 意：按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇，用后及时盖紧， 以防乙醇挥发）

　　6. 向吸附柱中加入 600 ul 漂洗液 Buffer W2 ，10000 rpm 离心 30 s ，弃滤液。

　　（注 意：按要求在 Buffer W2 中加入无水乙醇，用后及时盖紧， 以防乙醇挥发）

　　7. 重复操作步骤 6 一次。

　　（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用）

　　8. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm 离心 2 min ，以去除吸附膜上的乙醇。

　　9. 将吸附柱转入一干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 20 - 50 ul Buffer EB， 室温放置 2 min ，10000 rpm 离心 1 min ，收集 DNA。

　　(注 意：洗脱液体积不应少于 20 μl ，体积过小影响回收效率。为增加基因组 DNA 的得率，可将离心 得到的溶液再次加入吸附柱中，室温放置 2 min ，10000 rpm 离心 1 min 。洗脱液的 pH 对于洗脱效率 有很大影响。若用水作洗脱液应保证其 pH 值在 7.0 - 8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率)

　　注意事项

　　1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解。

　　2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 段小，提取量下降。

　　3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。