血液基因组DNA大量提取试剂盒1-20ML

　　血液基因组DNA大量提取试剂盒（1-20ML)

　　产品及特点

　　本试剂盒适用于各种新鲜及抗凝剂（柠檬酸钠、EDTA 等）处理过的全血基因组 DNA 大量提取。DNA 特异吸附到硅胶膜上，通过简单漂洗去除杂质，可快速纯化得到基因组 DNA 。使用本试剂盒得到的血液基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染，可直接进行 PCR 、 酶切和杂交等分子生物学实验。

　　它具有下列特点：

　　1. 操作简便：无需有机试剂沉淀，可快速获得高纯度的血液基因组 DNA；

　　2. 纯度高：去除污染物和抑制剂彻底，便于下游应用。

　　使用方法

　　自备试剂

　　无水乙醇、RNase A（可选）。

　　（注 意：a.使用前请先在缓冲液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标 签; b.把 10×红细胞裂解液 RBL 稀释成 1×工作液）

　　1. 处理样品：取 10-20 ml 全血于 50 ml 离心管中，加入 1.5 倍体积细胞裂解液 RBL 颠倒混匀 10 次，5,000 rpm 离心 3 min ，倒弃上清；重复 1-2 次，直到红细胞充分裂解；

　　（注 意：细胞裂解液 RBL 处理步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管。在极少 的情况下细胞裂解液 RBL 处理得到的沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。）

　　2. 加入 200ul Proteinase K 和 10 ml 缓冲液 GTL，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液混 合均匀。

　　3. 加入 10ml Buffer GL 涡旋混匀。

　　4. 56℃水浴 10-30 min。每隔 3 min 振荡一次，以助裂解，如遇特殊样本，未能很好裂解， 请适当延长孵育时间。

　　5. 加入 20 ml 无水乙醇，充分震荡，短暂离心以去除管盖内壁液体。

　　6. 将吸附柱放入收集管，将上一步所得溶液分次加入吸附柱中，10,000 rpm 离心 1 min， 弃收集管中滤液。

　　7. 向吸附柱内加入 10 ml Buffer W1 ，室温 10,000 rpm 离心 1 min ，弃收集管中滤液。

　　（注 意：按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇，用后及时盖紧， 以防乙醇挥发）

　　8. 向吸附柱内加入 10 ml Buffer W2 ，室温 10,000 rpm 离心1min ，弃收集管中滤液。

　　（注 意：Buffer W2 是浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧， 以防乙醇挥发）

　　9. 向吸附柱内加入 5 ml Buffer W2 ，室温 10,000 rpm 离心10 min ，弃收集管中废液。

　　（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用）

　　10. 将离心吸附柱置于一个新的 15 ml 塑料离心管（自备）中，开盖于空气中 5min ，加入 300-1000 ul Buffer EB，室温放置 5 min ，10,000 rpm 离心 2 min，离心管底溶液即基因 组 DNA。

　　（注 意：为增加洗脱效率，可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其pH 值在7.0 - 8.5 之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2 min， 再次离心收集）

　　注意事项

　　1. 如 Buffer GTL产生沉淀，可在 56℃水浴溶解。

　　2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 段小，提取量下降。

　　3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。

　　4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。