SPEEDYPURE快速质粒小提中量试剂盒

　　 SPEEDYPURE快速质粒小提中量试剂盒

　　产品及特点

　　本试剂盒用于质粒 DNA 的小量快速制备。在经典碱裂解法提取质粒的基础上进行改 进优化，可视化操作，可在 10 min 之内完成提取任务，大大降低了提取时间。质粒可从 菌体中快速释放，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。所得质粒可直接用于酶切、转化、 PCR 、实时荧光定量，测序等各种分子生物学实验。

　　它具有下列特点：

　　1. 快捷、高效：可视化操作，简便高效，节约时间；

　　2. 纯度高：沉淀致密，去杂干净。

　　保存条件

　　在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存 12 个月；更长时间的保存可置于 2-8℃ 。若溶 液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 应置于 2-8℃ 保存，可稳定保存 6 个月。

　　使用方法

　　1. 取 5-10 ml 过夜培养的菌液，室温 12,000 rpm 离心 1 min，尽量将上清去除干净。（注 意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取 5 ml 菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）

　　2. 加入 500 μl Buffer S1，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀，呈现出均匀混浊的棕红色。

　　（注 意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

　　3. 加入 500 μl Buffer S2，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。

　　（注 意：不可剧烈震荡，以免造成基因组 DNA 段的污染）

　　4. 加入 500 μl Buffer S5，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的沉淀物产生，继续混匀直到完全变为黄色，然后 12,000 rpm 离心 3 min。

　　（注 意：Buffer S5 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有紫色漂浮物，说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色）

　　5. 小心将上清液转移到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心 0.5min，弃收集管中滤液；吸附柱的容量是 750μl，要分 2 次转入。

　　6. 加入 600 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心 2 min，弃收集管中滤液。

　　（注 意：Buffer W2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

　　7. 将吸附柱置于一新的无菌1.5 ml离心管（自备）中，加入100-300 μl的洗脱液Buffer EB，室温 12,000 rpm 离心 1 min，离心管底溶液即质粒 DNA。

　　注意事项

　　1. 细菌培养时间一般为12 -16小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变。

　　2. 每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S5 是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。

　　3. 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关，一般1.5 ml 过 夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。

　　4. 吸附柱的吸附量为 70μl，要获得更多的质粒请分多次提取或用质粒大提试剂盒。