免提取pcr直接扩增试剂盒

　　 免提取pcr直接扩增试剂盒

　　产品特点

　　本产品专用于从各种常见的生物样品中快速释放DNA，并进行PCR扩增。它具有下列特点：

　　1.操作简便，用时短，约5-10分钟即可以得到用于核酸扩增的DNA模板，无需提取纯化步骤。

　　2. PCR扩增试剂包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。

　　3.可以用于几乎所有的生物样品包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡）石蜡组织切片等。

　　4. 在 PCR 结束后可以直接上样电泳。

　　5. 不含任何有毒有害的试剂。

　　6. 本产品可处理 400 份样品，进行 400 次 20μl 的 PCR 扩增。

　　使用方法

　　(一）DNA释放－液体样品

　　1. 将约 2 μL 液体样品（如全血、细胞培养液、病毒样品、粪便样品）加入到50μL核酸释放剂中。

　　注 意：总液体样品用量不要超过本产品用量的1/10

　　2. 室温放置3分钟；对于较难裂解的样品（如有厚壁的真菌等），则保温时间可以延长到 10-30分钟。

　　3. 简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行PCR扩增。

　　组织样品

　　1. 将 2 mg 左右的固体样品（如动物组织、植物叶片、种子等）加入到50 μL核酸释放剂中。

　　注 意：总样品量不要超过 1 mg/10μL的比例。

　　2. 95℃加热 5 分钟；对于较难裂解的样品（如石蜡组织切片、血斑等），则保温时间可以延长到 10-30 分钟。

　　3. 简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行 PCR 扩增。

　　(二）PCR 扩增

　　注 意：以下举例为常规PCR体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化）

　　1. PCR体系推荐反应体系（20μl）

　　注 意：

　　裂解液体积好不要超过反应体积的 1/10，对 20μL 的扩增体系，加入的裂解液不要超过2μL。引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

　　注 意：

　　A. 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

　　B. 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Taq DNA Polymerase 的扩增效率为1kb/30 sec。

　　C. 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数

　　结果检测

　　反应结束后取5 μl反应产物，然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。