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高压蒸汽灭菌是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌。原理是在密闭的容器中，水的沸点因为蒸汽压力增大而升高，以此提高蒸汽的温度，用来进行有效灭菌 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅（autoclave）内，加热时蒸汽不外溢，高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。
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