小鼠抗羊小反刍兽疫检测试剂盒

　　产品详情

　　泉州市睿信生物科技有限公司是集研发、生产、销售、服务及品牌代理为一体的生物技术公司，目前可提供各种免疫学试剂盒、生化试剂、分子生物学试剂等高品质产品及服务，涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。

　　睿信生物拥有完善的技术服务团队，严格的技术服务流程，获得客户的一致好评。

　　我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供。

　　小鼠抗羊小反刍兽疫检测试剂盒限制性

　　1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。

　　2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。

　　3、跟其他的试剂盒或者组分不能混用。

　　4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

　　5、如果样本值高于高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。

　　6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜会干扰检测结果，检测前，请排出该因素。

　　7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

　　技术提示

　　1、混合蛋白溶液时，避免起泡。

　　2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。

　　3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。

　　4、使用自动洗板机时，加入一个30秒浸泡的步骤，可以提高检测精度。

　　5、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。

　　6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。

　　7、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

　　8、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

　　试剂盒组分与保存

　　未开封的试剂盒保存在2-8度，不得使用过期试剂盒。

　　校准品浓度依次为：200、 100、 50、 25、 12.5、 6.25 ng/mL。

　　其他用品

　　1、酶标仪（450nm）

　　2、精密移液器及一次性吸头

　　3、蒸馏水

　　4、洗瓶或者自动洗板机

　　5、37℃水浴锅或恒温箱

　　6、500ml量筒

　　生物安全

　　1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

　　2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。

　　3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。

　　4、戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。

　　样品的采集和储存

　　以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

　　1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

　　2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离，保存在-20℃以下，避免反复冻融。

　　3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

　　样本收集后，无法一次检测完毕，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

　　4、组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1: 9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。后将匀浆液5000×g离心 5-10分钟，取上清检测。

　　5、细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每 1×106 个细胞中加入150-200μLPBS重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟，取上清检测。

　　6、其他生物体液：1000×g 离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

　　试剂准备

　　1、使用前，所有的组分都要至少复温60min，确保充分复温到室温。

　　2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。

　　3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

　　操作程序

　　所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

　　1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

　　2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

　　设置标准品孔、0值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，0值孔加样本稀释液50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本50μL。

　　3、除空白孔外，标准品孔、0值孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测100μL。

　　4、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20S，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

　　6、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

　　7、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。

　　结果计算

　　1、以标准品浓度做为纵坐标（6个标准品孔，加1个0值孔，共7个浓度点），对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。

　　2、如果样品被稀释，通过上述方法测的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的浓度。

　　试剂盒性能指标

　　1、物理性能

　　试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。

　　2、剂量反应曲线线性

　　校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。

　　3、精密度

　　批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度。批内变异系数CV%小于10%。

　　批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度。批间变异系数CV%小于15%。

　　4、灵敏度

　　低检出剂量小于1.0 ng/mL。

　　5、回收率

　　三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率，回收率在85%-115%之间。

　　6、特异性

　　本试剂盒识别天然和重组人血红蛋白A2（HbA2），与结构类似物无交叉。

　　7、稳定性

　　2℃-8℃保存，有效期6个月。

　　8、 检测范围

　　6.25 ng/mL – 200 ng/mL。

　　8、 检测范围

　　6.25 ng/mL – 200 ng/mL。