PA317细胞（逆转录病毒包被的NIH3T3细胞）_科研专用，厂家直发

PA317细胞源自TK-NIH/3T3细胞，通过pBR322中的包装结构DNA(pPAM3)和pBR322中的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因共同转染构建而成。通过感染或转染将逆转录病毒载体导入PA317细胞，会生成可以感染许多哺乳动物细胞的双嗜性载体颗粒，PA317细胞生成的病毒颗粒已成功地用于将基因导入人类。但是可能因为用于构建PA317细胞而转入的DNA丢失，能够包装逆转录病毒载体的PA317细胞百分比随传代而减少，在含0.03mM次黄嘌呤、0.001mM氨甲喋呤和0.02mM胸苷的培养基中短暂(大约5天)培养可以选出保留了包装功能的细胞。选择后，PA317细胞应在HT培养基(0.03mM次黄嘌呤、0.02mM胸苷)中培养4天，以稀释残留的氨甲喋呤，此后PA317细胞不需选择可以稳定至少1个月。PA317可以用于3D细胞培养，也是一种合适的转染宿主。

传代方法：
1.尽量吸干净T25瓶原培养基；
2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；
4.将培养瓶放入37度培养箱消化；
5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；
6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项：
不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间
消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

冻存操作 ：
冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

冻存规格：200-300万/ml，1ml每管

冻存方法：1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

注意事项：冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

Tips：1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间； 2.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条

我们推荐使用尚恩生物 逆转录病毒包被的NIH3T3细胞专用培养基（产品货号：SNLM-146）作为PA317(逆转录病毒包被的NIH3T3细胞)[暂不提供]的专用培养基。

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