博科荧光定量pcr仪

　　LineGene96plus 软件操作流程双击桌面上 LineGene96plus 荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测系统的软件运行快捷图标，电脑屏幕将出现相应的启动画面。软件操作流程（以定量为例）：1、从主页（Home）界面上，单击定量，创建定量实验窗口。2、实验前设置流程1）设置检测项目：单击“设置”，“检测项目”：根据试剂所用的荧光探针或染料选择相应的“报告荧光”，如：FAM，SYBR 等（具体可参考试剂盒说明书）。若有多种荧光探针，需点击“添加检测项目”，添加多种报告荧光。“项目名”可根据每种报告荧光代表的意义进行修改（具体可参考试剂盒说明书）。2）设置样本信息：单击“批量添加”，弹出样本批量添加窗口，“开始样本 ID”填“1”，“样本数量”根据实际样本数量填写，然后可填写相应的样本信息，如：病人姓名，年龄等。3）设置反应板：根据 PCR 单管或八联管实际放置位置，拖动鼠标或按住 Ctrl键点击鼠标，选中相应的孔位，并勾上左边的相应的检测项目。标准品需更改“属性”为”S”并输入“浓度”，若浓度为 5×107，则直接输入 50000000，并按 Enter 键。阴阳性对照品亦需更改“属性”为”N”及”P”，然后选中所有放置了试剂的孔位，点击“样本自动排列”，根据实际放置情况，选择“横排”或“竖排”，点击“确定”。（反应板若没设置，仪器无法正常运行）4）设置程序：a.新建运行段：可以新建恒温段、循环段或熔解段※也可以直接单击新建运行段，默认为新建循环段。b.新建节：可以新建在当前选中节之前或之后※也可以直接单击新建节，默认为添加在当前选中运行段或当前选中运行节之后。根据试剂盒说明书，设置每步反应的温度和时间，循环数，加液量，并在读取荧光的步骤下勾选“读取荧光”。热盖温度保持默认 105℃。5）增益调节：在正式运行实验之前，需要调节合适的增益。杭州博日科技有限公司 a 手动调节：另外设置“60℃，10s，10 个循环”的程序，检测项目、反应板设置同前，样本信息可不设，采用参考增益运行检测试剂本底荧光强度，若本底荧光强度在 1500-3000 之间，则增益值合适，停止运行，若本底荧光强度太低，则增大增益值，若本底荧光强度太高，则降低增益值，直至合适增益值。b 自动增益：点击“开始运行”，点击“自动增益”，“目标荧光值”设置为“1800”，“自动增益孔位”选择放置相应试剂的所有孔位中任一孔位即可。若 A3,B3，......H3 八个孔位是 FAM，A4，B4，.........H4 八个孔位是 HEX, 则 FAM的“自动增益孔位”选择 A3,B3，......H3 八个孔位中的任一孔即可（但不可选择A4，B4，.........H4 八个孔位中的某一孔位），HEX 的“自动增益孔位”选择 A4，B4，.........H4 八个孔位中的任一孔即可。3、运行：点击“运行”，点击“开始运行”，输入先前调节的合适的增益值。点击“确定”，PCR实验即开始运行。在软件界面上，可以看到反应剩余时间。4、结果分析：1）实验结果完成后，若要导出实验结果到 EXCEL，可点击“导出实验”右边黑色三角号，点击“导出到 EXCEL”。2）若试剂盒中有标准品，需在“反应板”设置里，将标准品“属性”改为“S”，并输入相应浓度。若浓度为 5×107，则直接输入 50000000，并按 Enter 键。然后重新点击“分析”，则可以输出标准曲线。5、模板保存：若近期均做同一种试剂盒，可点击“保存”右边的下拉菜单键，点击“另存为模板”，“模板类别”里输入模板名称，如：流感，手足口等，“模板内容”下面将“样本信息”和“反应板设置”前的“勾号”去掉，保存“检测项目”、“运行程序设置”和“增益参数”，点击“确定”保存即可。下次做实验可直接调用。相对定量1、设置：1）检测项目：设置方法参考定量。参考基因和目标基因需要分设为不同的杭州博日科技有限公司 检测项目。2）样本信息：设置方法参考定量。样本数目等同于样本模板的数目。3）反应板：参考定量。4）程序设置：参考定量。2、分析：点击“分析设置”，“相对定量”，选择“相对定量分析方法”（一般选DeltDeltCt 法）、“标准较比样本”（一般为实验的对照组）、“管家基因检测项目”，点击“保存并分析”。SNP：1、双击桌面“PCR”图标，打开软件。点击“定量”，建立实验。2、设置“检测项目”：根据试剂盒说明书，选择相应的报告荧光。如有多个报告荧光，则需要点击“添加检测项目”，添加多个检测项目。3、设置“样本信息”：点击“批量添加”，“开始样本 ID”填“1”，“样本数量”根据实际样本数量填写，然后可填写相应的样本信息，如：病人姓名，年龄等。4、设置“反应板”：根据 PCR 单管或八联管实际放置位置，选中相应的孔位，并勾上左边的相应的检测项目。然后选中所有放置了试剂的孔位，点击“样本自动排列”，根据实际放置情况，选择“横排”或“竖排”，点击“确定”。（反应板若没设置，仪器无法正常运行）5、设置“反应程序”：根据试剂盒说明书，设置每步反应的温度和时间，循环数，加液量，并在读取荧光的步骤下勾选“读取荧光”。6、点击“运行”，点击“开始运行”，点击“自动增益”，“目标荧光值”设置为“1800”，“自动增益孔位”选择放置相应试剂的所有孔位中任一孔位即可。点击“确定”，PCR 实验即开始运行。例如：若 A3,B3，......H3 八个孔位是 FAM，A4，B4，.........H4 八个孔位是HEX, 则 FAM 的“自动增益孔位”选择 A3,B3，......H3 八个孔位中的任一孔即可（但不可选择 A4，B4，.........H4 八个孔位中的某一孔位），HEX 的“自动增益孔位”选择 A4，B4，.........H4 八个孔位中的任一孔即可。杭州博日科技有限公司 7、若近期均做同一种试剂盒，可点击“保存”右边的黑色三角号，出现下拉菜单，点击“另存为模板”，“模板类别”里输入模板名称，如：流感，手足口等，“模板内容”下面将“样本信息”和“反应板设置”前的“勾号”去掉，保存“检测项目”、“运行程序设置”和“增益参数”，点击“确定”保存即可。下次做实验可直接调用。实验分析：1、实验结果完成后，若要导出实验结果到 EXCEL，可点击“导出实验”右边黑色三角号，点击“导出到 EXCEL”。2、若试剂盒中有标准品，需在“反应板”设置里，将标准品“属性”改为“S”，并输入相应浓度。若浓度为 5×107，则直接输入 50000000，并按 Enter 键。然后重新点击“分析”，则可以看到标准曲线