弹性蛋白是一种对真核和原核细胞都有作用的有效选择抗生素。
弹性蛋白是一种分离自灰生链霉菌的肽基核苷抗生素,可通过干扰核糖体机制中的肽键形成来抑制蛋白质合成。
蜡状芽孢杆菌(bsr) 的杀稻瘟菌素抗性基因赋予了对杀稻瘟菌素的抗性,该基因编码杀稻瘟菌素-S脱氨酶[1]。
对Streptoverticillum sp [2]的blastcidin S乙酰基转移酶基因(bls)和对曲霉菌[3]的blasticidin S脱氨酶基因(BSD)也赋予了对杀稻瘟菌素的抗性。
通常,哺乳动物细胞对杀稻瘟素浓度为1-10 μg / ml敏感,对细菌为25-100 μg / ml敏感。
由杀稻瘟菌素诱导的细胞死亡迅速发生,从而允许在一周内选择带有杀稻瘟菌素抗性基因的转染细胞系。
参考:
1. Izumi M.等,1991。弹性蛋白S抗性基因(bsr):一种新型的哺乳动物细胞选择标记。细胞研究实验197:229-33。
2.Perez-Gonalez J.等人,1990。来自链霉菌属菌种的杀菌素S乙酰转移酶编码基因的克隆。基因。86:129-34。
3. Kimura M.等人,1994年。来自土曲霉(BSD)的弹性蛋白S脱氨酶基因:一种用于转染哺乳动物细胞的新的抗药性基因。Biochim。生物物理学。Acta。1219:653-9。
规格
产品浓度: 10 mg / ml
质量控制:每个批次都经过全面测试,以确保批次之间不存在差异。
纯度: ≥95%(HPLC)
内毒素水平: <1 EU / mg
物化特性: pH,外观
经过细胞培养测试:在对杀稻瘟菌素敏感和对杀稻瘟菌素具有抵抗力的哺乳动物细胞系中验证了效力
痕量污染物的非细胞毒性:对杀稻瘟菌素抗性细胞没有长期影响
内容
盐酸弹性蛋白以无菌过滤溶液的形式在HEPES缓冲液中以10 mg / ml的形式提供。
该产品有四种包装尺寸:
ant-bl-05: 5 x 1毫升(50毫克)
ant-bl-1: 10 x 1毫升(100毫克)
ant-bl-5: 50 x 1毫升(500毫克)
ant-bl-5b: 1 x 50毫升(500毫克)
盐酸弹性蛋白也以粉末形式提供:
ant-bl-10p: 1克(粉末)
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弹性蛋白是在室温下运输的。
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收到后应将其保存在4°C或-20°C下。
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弹力蛋白是有害的化合物。有关处理说明,请参阅安全数据表。
工作浓度
杀稻瘟菌素对哺乳动物细胞系的工作浓度从1到10μg/ ml不等,在某些情况下高达30μg/ ml。
在开始的实验中,我们建议确定杀死宿主细胞系所需的抗生素浓度。
处理后,细胞死亡迅速发生,从而允许在转染后的7天之内用带有bsr或BSD基因的质粒选择转染的细胞。
下面列出了在哺乳动物细胞的一些实例中用于选择的杀稻瘟素的建议浓度。
| 细胞系
|
中等的
|
弹力蛋白浓度
|
参考
|
|---|---|---|---|
|
CHO(卵巢细胞)
|
记忆体
|
5-10微克/毫升
|
1,2
|
| HEK293(人类胚胎肾细胞) | 记忆体 | 5-15微克/毫升 | 3 4 |
| HeLa(人类子宫细胞) | 记忆体 | 2.5-10微克/毫升 | 5、6 |
| Neuro2a(小鼠成神经细胞) | 记忆体 | 30微克/毫升 | 7 |
| THP-1(人类单核细胞) | RPMI | 10微克/毫升 | 8 |
参考:
1. Dorgham K.等,2009。一种具有抗炎活性的工程CX3CR1拮抗剂。J Leukoc生物学。86(4):903-11。
2. Le Bon L.等人,2014。边缘蛋白调节Notch-配体顺式和反式相互作用,以信号状态。eLife Sci,3:e02950。
3. Tomecki R.等人,2014。多发性骨髓瘤相关的hDIS3突变引起细胞RNA代谢紊乱,并提示hDIS3 PIN结构域可能是潜在的药物靶标。42:1270-90。
4.Edbauer D.等人,2004。尼卡斯汀和早老素的共表达拯救了APH-1功能丧失的突变体。279:37311-5。
5. Khandelia P.等人,2011。简化的平台,可在培养的哺乳动物细胞中短发夹RNA干扰和转基因。PNAS 108:12799-804。
6. Lee HK.et al。,2007。β-内酰胺酶互补作用在toll样受体信号抑制剂高通量筛选中的应用。摩尔Pharmacol。72:868-75。
7. Matsumoto G.等人,2011年。p62 / SQSTM1的丝氨酸403磷酸化调节泛素化蛋白的选择性自噬清除。摩尔细胞。44:279-89。
8. Schepetkin IA。等人,2009年。从桔小叶Epilobium angustifolium分离的oenothein B的免疫调节活性。J Immunol。183:6754-66。