biosharp 脂质体2000/Lip2000转染试剂

　　Lip2000Transfection Reagent

　　产品简介：

　　Lip2000是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适合于将核*(DNA和RNA)转染至真核细胞，具有低细胞毒性、对多种类型的细胞都具有高转染效率、转染时血清的存在不影响转染效率的优点。

　　适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。

　　质粒DNA的转染：对大多数细胞来说，DNA(μg)与Lip2000(μl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

　　使用说明：（以 24 孔板为例）

　　1、细胞铺板：

　　贴壁细胞：转染前一天，用500μl不含抗生素的培养基接种0.5-2×105 细胞，使之第二天能达到 70-90%汇合。

　　悬浮细胞：在准备 DNA-Lip2000 复合物之前，用500μl不含抗生素的培养基接种4-8×105细胞即可。

　　2、对每个转染样品，进行以下操作

　　（1）在离心管里分别加入50μl无血清培养基（如OPTI-MEM Ⅰ 培养基） 和 0.8 μg DNA，轻柔混匀，制成DNA稀释液。

　　（2）在另一个离心管里分别加入50μl无血清培养基（如OPTI-MEM Ⅰ 培养基）和2.0μl Lip2000（注意用前先混匀），轻柔混匀，制成 Lip2000稀释液，室温静置 5 分钟。

　　（3）将 DNA 稀释液和 Lip2000 稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 20分钟，形成DNA-Lip2000 复合物。DNA-Lip2000 复合物在室温下可稳定存在 6 小时。

　　3、将 DNA-Lip2000 复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。

　　4、在 37℃CO2 培养箱中培养 4-6 小时后更换培养基，继续培养18-48 小时

　　5、如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10 或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。

　　质粒 DNA 转染的优化：为达到*高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对 DNA 和 Lip2000 的比例以及细胞密度进行优化，一般在1:0.5~1:5 的范围内优化DNA (μg) 和 Lip2000 (μl) 的比例。

　　保存条件：

　　2-4℃保存一年（避免冷冻）。