30min植物基因组DNA提取试剂盒

　　30min植物基因组DNA提取试剂盒

　　描述：

　　该试剂盒采用独特的裂解液，可快速可靠的从多糖、多酚含量较高的植物组织样品中纯化出高纯度的DNA。应用本试剂盒提取的DNA可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern 杂交等多种分子生物学实验。

　　注意事项：

　　（1） 本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇，无需单独添加。

　　（2）蛋白酶K和Rnase A长期保存请储存于-20℃，短期室温保存（6 个月），其它组分储存于室温。

　　（3）Plant AP2含有CTAB，室温储存会出现白色沉淀，使用前放置于56℃水浴锅中溶解后使用。

　　操作方法：

　　（1）样本组织悬液制备

　　研钵研磨法：在1.5 ml EP管中加入600μl的Plant AP1 裂解液，并在管盖上加入5μl的Rnase A。将研磨后的植物组织（干重40~60 mg，湿重150 mg）加入到 Plant AP1裂解液中，漩涡震荡混合15s。

　　钢珠研磨法：在研磨EP管中加入700μl的Plant AP1 裂解液，加入植物组织（干重 50~80 mg，湿重200 mg），并加入钢珠进行研磨，研磨完毕后，取600 μl 的组织悬液到新的1.5 ml EP管中，并在管盖上加入5μl的Rnase A。

　　（2）向上述组织悬液中加入250μl Plant AP2 裂解液，漩涡混合15s，56℃水浴锅（或室温）静置5min，以消化RNA。

　　（3）向上述溶液中加入20μl 蛋白酶 K，漩涡混合10s，于56℃水浴锅（或室温）中消化 5~15min。

　　（4）13,000rpm 离心 5min，吸取600 μl 上清到新的1.5mlEP 管中，并加入 500μl ，漩涡混合 15s。

　　（5）13,000rpm 离心 2min，溶液将分为无色上层水相（DNA）、中间层（蛋白）和绿色下层油相（酚类）。

　　（6）吸取400μl上层无色上清液到新的1.5 ml EP 管中，并加入450μl的Plant LB3溶液，漩涡10s后，倒入到吸附柱中，13,000rpm离心 1min。

　　（7）倒掉废液。向吸附柱中加入500μl Washing Buffer，13,000rpm离心15s。重复此步骤一次。

　　（8）将吸附柱重新放回离心机，13000rpm空离心2min，将残留的乙醇彻底甩干。

　　将吸附柱芯放入到1.5 ml收集管中，向吸附柱芯中加入60~150μl DNA Elution Buffer，室温放置1min，13,000rpm离心1min，洗脱液即为基因组 DNA，冷冻保存。