HiFi One-Step RTPCR Mix

　　HiFi One-Step RTPCR Mix

　　描述：

　　本试剂采用稳定高效的RT-PCR预混体系，是以RNA为模板进行一步法RT-PCR 的专用试剂。其原理为用基因特异性引物进行反转录反应，获得链cDNA（不可使用Oligo（dT或Random Rimer合成链cDNA），再使用基因特异性正向引物和反向引物进行PCR扩增，在同一反应体系中一步完成从反转录到PCR的全部过程。反应体系中已含有电泳所需的指试剂（蓝色和黄色），反应后可以直接进行电泳。

　　在本试剂盒中，将耐热M-MLV反转录酶、Rnase Inhibitor、Hotstart 高保真 DNA聚合酶以及稳定剂等配制成50×One-Step Enzyme Mix预混液；反应 Buffer、dNTP以及电泳指示染料配制成 5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加简单便，扩增产物可用于平端克隆和DNA测序。

　　主要优势：

　　耐热M-MLV反转录酶可在55℃反应能更好的打开复杂二级结构，只需10min 即可完成逆转录。

　　DNA聚合酶为热启动型高保真酶，能够有效的抑制非特异性反应且具有较高的校正活性，酶激活仅需2min。

　　具有宽泛的模板量兼容性，10ng~1μg都可有效扩增。

　　反应过程中无需开盖，避免了操作过程中的污染危害。

　　储存：请置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融。

　　注意：

　　1. 50×One-Step Enzyme Mix粘度高，次使用之前要离心收集至反应管底部，吸取时应缓慢小心。

　　2. 由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶，反应配制可在常温进行，但各组分应-20°C保存。

　　实验操作和反应条件：

　　1.按以下组分配制反应液注意：

　　超过1μg的RNA模板量会抑制PCR反应，建议次可使用200ng的RNA模板，然后根据结果进行优化。

　　2. 在PCR仪上按以下条件进行RT-PCR反应:

　　3. PCR反应结束后，可取5μl产物直接进行电泳检测。预混液中已经包含绿色染料，无需再加入DNA Loading Buffer。1% Agarose电泳时，蓝色指示剂指示3~5 kb，黄色示剂指示<50 bp。