DNA凝胶凝胶回收试剂盒

　　DNA凝胶凝胶回收试剂盒

　　保存条件:

　　常温（10~25℃）保存 12 个月。

　　产品简介:

　　本试剂盒适用于从琼脂糖凝胶中回收多至 10 μg DNA（80 bp~10 kb），回收率可达 65~85%。琼脂糖凝胶在高离序盐中（Buffer GN）溶解后，DNA 段选择性吸附于离心柱内的硅基质膜上。回收后的 DNA 纯度高，并能保持段完整性和高生物学活性，可直接用于测序、连接、PCR 扩增、体外转录等分子生物学实验。

　　产品特点:

　　快速：胶块无需称重，操作简便；

　　高效：回收效率高，获得的目的 DNA 纯度高；

　　适用性广：

　　一盒两用，段凝胶回收及 PCR 产物直接回收等。

　　适用范围:

　　本品适用于 PCR 产物直接回收、DNA 段的凝胶回收、酶切产物的凝胶回收等。

　　注意事项:

　　1. Buffer W1 使用前加入量的无水乙醇，各溶液使用后请及时将盖子拧紧；

　　2. 电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果；

　　3. 建议使用高质量的琼脂糖，以免其中杂质影响下游连接等实验；

　　4. Buffer GN 中含刺激性溶液，操作时要戴乳胶手套和眼镜；

　　5. 回收产物可通过琼脂糖电泳或分光光度计检测是否回收成功。使用分光光度计时，若使用 Elution Buffer 进行洗脱，建议使用 Elution Buffer 进行校准。

　　使用方法:

　　一、PCR 产物直接回收

　　1. 按照 PCR 原液：Buffer GN=1：3 的比例加入 Buffer GN（不少于 150 μL）后吸打混匀（如：在1.5 mL 离心管中，50 μL PCR 原液加入 150 μL Buffer GN 后吹打混匀）；

　　直接进入步骤 5。

　　二、从琼脂糖凝胶中回收:

　　1. （可选）将吸附柱 EC 置于收集管中，加入 250 μL Buffer BL，12,000 × g 离心 1 min，活化硅胶膜；

　　2. 在 365 nm 长波紫外灯下，用干净刀将目的条带切下，尽量切除不含目的 DNA 条带，得到凝胶体积越小越好（切胶时，为避免紫外照射时间过长对 DNA 造成损伤，建议快速切胶）；

　　3. 将含有目的 DNA 条带的凝胶放入 2 mL 离心管中，加入 500 μL 的 Buffer GN（若胶块过大，适当添加 Buffer GN 至溶液呈淡黄色）；

　　4. 65℃水浴 4~6 min，每 2~3 min 上下颠倒混匀一次至凝胶完全融化，溶液呈淡黄色；

　　5. 将溶液转入吸附柱 EC 中，12,000 ×g 离心 1 min，弃废液，将吸附柱 EC 放回空收集管；

　　6. 在吸附柱 EC 中加入 700 μL Buffer W1（请先检查是否已加入体积的无水乙醇），12,000 ×g离心 1 min，弃废液；

　　注意：如果回收的 DNA 是用于克隆实验或直接测序等，建议 Buffer W1 加入后静置 2~5 min 再离心。

　　7. 重复步骤 6 一次；

　　8. 将吸附柱 EC 放回空收集管中，12,000 ×g 离心 2 min；

　　9. 取出吸附柱，置于干净的 1.5 mL 离心管中，在吸附膜的中间部位加 35~50 μL Elution Buffer（60~65℃预热 Elution Buffer 效果更好），20~25℃放置 2 min，12,000 ×g 离心 2 min。如需较多量 DNA，可将得到的溶液重新转入吸附柱中，离心 2 min。

　　注意：洗脱体积越大，洗脱得率越高。若需得到较高浓度的 DNA，可以适当减少洗脱体积，但最小体积应不少于 25 μL，体积过小会降低 DNA 洗脱得率，降低产量。洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用 ddH2O 洗脱，保证 pH 值在 7.0~8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。DNA 产物应保存在-20°C 以防 DNA 降解。