MaxEndoFree无内毒素质粒大提试剂盒

MaxEndoFree无内毒素质粒大提试剂盒

产品及特点

本试剂盒适用于无内毒素高纯度质粒DNA的大量制备与纯化，柱上去除内毒素，操作简单。菌体经改良的碱裂解处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。通过去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他杂质，得到高纯度的无内毒素质粒DNA，所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、细胞转染等分子生物学实验。

特点：

• 快捷、高效：操作简便，得率高，节约时间
• 纯度高：沉淀致密，去杂干净
• 内毒素去除简单：柱上去除内毒素，方便快速，清除干净

保存条件

在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入RNase A后的Buffer S1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

使用方法

柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入2.5ml的平衡液BL，10,000 rpm离心2 min，弃收集管中滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

1. 取100-200ml过夜培养的菌液，室温10,000 rpm离心2 min，弃上清。
2. 加入10ml Buffer S1，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀。
   注意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低
3. 加入10ml Buffer S2，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠。
   注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA的污染，所用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏
4. 加入10ml Buffer S4，立即颠倒混匀，可见白色的絮状物产生，然后10,000 rpm离心10-30 min。小心将上清液转移到一干净的50ml离心管中，加入0.3倍混匀。
   注意：Buffer S4加入后应立即混合，避免产生局部沉淀
5. 小心将上清液转移到离心吸附柱中，10,000 rpm离心1 min，弃收集管中的滤液。
   注意：吸附柱的容积15 ml，要分多次转入
6. 向吸附柱中加入5ml ToxinOut Buffer，室温静置5 min，10,000 rpm离心1 min，弃收集管中滤液。
7. 加入10ml Buffer W2，室温10,000 rpm离心1 min，弃收集管中滤液。
   注意：Buffer W2为浓缩液，要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发
8. 加入5ml Buffer W2，室温10,000 rpm离心1 min，弃收集管中滤液。
9. 室温10,000 rpm离心5 min，甩干残留液体。
10. 将离心吸附柱置于一个新的50ml塑料离心管中，打开管盖，放置5 min，使乙醇彻底挥发干净。
11. 加入1-2ml洗脱液Buffer EB，室温放置2 min，10,000 rpm离心2 min，离心管底溶液即质粒DNA。
    注意：为增加洗脱效率，可将得到的质粒溶液重新加入到吸附柱中重复步骤11一次，如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0-8.5之间

注意事项

• 细菌培养时间一般为12-16小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变。
• 每次使用时都要注意Buffer S2和S4是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。
• 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。