MaxEndoFree无内毒素质粒小提试剂盒

MaxEndoFree无内毒素质粒小提试剂盒操作指南

产品概述

本试剂盒专为小规模制备无内毒素质粒DNA设计，适用于细胞转染等对纯度要求高的实验。通过碱裂解、硅胶膜吸附及内毒素清除技术，可从1-5 mL菌液中提取高达20 μg的高纯度质粒。

核心特点

1. 高效快捷：操作简便，1小时内完成提取。
2. 高纯度：硅胶膜特异性吸附质粒，去除蛋白、基因组DNA及内毒素。
3. 去内毒素优化：专用ToxinOut Buffer清除内毒素，适合敏感实验（如细胞转染）。

保存条件

• 未开封试剂盒：室温（15-25℃）干燥保存12个月；长期存放建议2-8℃。
• RNase A处理后的Buffer S1：2-8℃保存，稳定6个月。
• 注意：若溶液出现沉淀，37℃加热溶解后使用。

操作步骤

1. 菌体收集

• 取1-5 mL过夜培养菌液，12,000 rpm离心1分钟，彻底弃上清。
• 关键：菌量不足时可重复离心富集。

2. 菌体重悬

• 加250 μL Buffer S1，涡旋或吹打至菌体完全悬浮（无团块）。
• 注意：未充分悬浮会导致裂解不完全，影响得率。

3. 碱裂解

• 加250 μL Buffer S2，轻柔颠倒混匀至溶液变清亮粘稠（不超过5分钟）。
• 禁忌：剧烈震荡会剪切基因组DNA，造成污染。

4. 中和沉淀

• 加250 μL Buffer S4，立即颠倒混匀6-8次，12,000 rpm离心10分钟。
• 转移上清至新管（避免沉淀），加入250 μL异丙醇混匀。

5. 柱吸附与内毒素清除

• 将混合液分次加入吸附柱（每次≤750 μL），12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
• 加250 μL ToxinOut Buffer，静置5分钟，离心1分钟去内毒素。

6. 洗涤与干燥

• 依次用600 μL、500 μL Buffer W2（含乙醇）洗涤，每次离心30秒。
• 空柱离心2分钟彻底去除乙醇残留。

7. 洗脱

• 将吸附柱转移至新EP管，加50-100 μL预热的Buffer EB（或pH 7.0-8.5的水），静置2分钟后离心1分钟。
• 提高得率：重复洗脱一次或使用60℃预热洗脱液。

注意事项

• Buffer W2：使用前需按比例加乙醇，用后密封防挥发。
• 洗脱液pH：若用水洗脱，需用NaOH调整pH至7.0-8.5。
• 低拷贝/大质粒：建议增加菌液量至5 mL，或延长菌体培养时间（如补加抗生素后培养6小时）。

常见问题

• 低得率：检查菌体是否充分裂解（步骤2、3）或洗脱液是否预热。
• 内毒素残留：确保ToxinOut Buffer作用时间≥5分钟。

如需进一步优化，请联系技术支持。