SPEEDYPURE快速质粒大提试剂盒

SPEEDYPURE快速质粒大提试剂盒

产品及特点

本试剂盒用于质粒DNA的小量快速制备。在经典碱裂解法提取质粒的基础上进行改进优化，可视化操作，可在10min之内完成提取任务，大大降低了提取时间。质粒可从菌体中快速释放，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、实时荧光定量，测序等各种分子生物学实验。

主要特点：

1. 快捷、高效：可视化操作，简便高效，节约时间；

2. 纯度高：沉淀致密，去杂干净。

保存条件

在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入RNase A后的Buffer S1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

使用方法

1. 取100ml-200ml过夜培养的菌液，室温8000-10,000rpm离心2min，尽量将上清去除干净。

2. 加入10ml Buffer S1，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀，呈现出均匀混浊的棕红色。

（注意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

3. 加入10ml Buffer S2，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。

（注意：不可剧烈震荡，以免造成基因组DNA的污染）

4. 加入8ml Buffer S5，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的沉淀物产生，继续混匀直到完全变为黄色，再加入2ml无水乙醇，混匀，然后8000-10,000rpm离心10min。

（Buffer S5加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有紫色漂浮物，说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色）

5. 小心将上清液转移到离心吸附柱中，8000-10,000rpm离心1min，弃收集管中滤液。（注意：吸附柱的容量是15ml，分多次加入）

6. 加入10ml Buffer W2，8000-10,000rpm离心2min，弃收集管中滤液。

（注意：Buffer W2为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

7. 将吸附柱置于一新的50ml离心管中，加入1-3ml的洗脱液Buffer EB，室温8000-10,000rpm离心2min，离心管底溶液即质粒DNA。

注意事项

1. 细菌培养时间一般为12-16小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质粒质量甚至导致质粒DNA突变。

2. 每次使用时都要注意Buffer S2和S5是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。

3. 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。