HiPURE高纯度质粒小提试剂盒

HiPURE高纯度质粒小提试剂盒使用指南（优化版）

产品特点

• 高效快捷：操作简便，1小时内完成提取，得率高。
• 高纯度：专利吸附柱技术去除杂质，质粒可直接用于酶切、PCR、测序、转染等实验。
• 灵活适配：支持1-5 mL菌液处理，兼容低拷贝/大质粒提取（需调整步骤）。

保存条件

• 未开封试剂：室温（15-25℃）干燥保存12个月；长期保存建议2-8℃。
• RNase A处理后的Buffer S1：2-8℃保存，稳定6个月。
• 注意：若Buffer W1/W2出现沉淀，37℃加热溶解后使用。

操作步骤（关键细节优化）

1. 柱平衡

   • 吸附柱中加入400 μL平衡液BL，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
     （新开封吸附柱需平衡；重复使用的柱子需当日处理）

2. 菌体收集

   • 取1-5 mL过夜菌液，12,000 rpm离心1分钟，彻底弃上清。
     （菌量不足时，可重复离心收集；高浓度菌液取1.5 mL即可）

3. 菌体重悬

   • 加250 μL Buffer S1，涡旋或吹打至无可见菌块。
     （悬浮不彻底会导致裂解不完全，影响得率）

4. 裂解

   • 加250 μL Buffer S2，轻柔颠倒混匀至溶液清亮粘稠（≤5分钟）。
     （避免剧烈震荡，防止基因组DNA污染；若未清亮，需增加Buffer S2用量）

5. 中和沉淀

   • 加350 μL Buffer S3，立即颠倒混匀6-8次，静置2分钟后12,000 rpm离心5分钟。
     （Buffer S3需快速混匀，避免局部沉淀）

6. 吸附质粒

   • 上清转移至吸附柱，12,000 rpm离心0.5分钟，弃滤液。
     （若宿主菌为endA+型如TG1/BL21，需增加步骤7）

7. 去核酸酶（可选）

   • 加500 μL Buffer W1，离心0.5分钟，弃滤液。
     （仅需用于endA+菌株或低拷贝质粒）

8. 洗涤

   • 加600 μL Buffer W2，离心0.5分钟；重复一次。
     （Buffer W2含乙醇，使用后立即盖紧瓶盖）

9. 去残留乙醇

   • 空柱12,000 rpm离心2分钟，彻底干燥。
     （关键步骤！残留乙醇会抑制后续酶反应）

10. 洗脱

    • 将吸附柱移至新1.5 mL离心管，加50-100 μL预热的Buffer EB（60℃），静置2分钟后离心1分钟。
      （为提高得率，可重复洗脱一次；水洗脱需调pH至7.0-8.5）

低拷贝/大质粒优化建议

• 增加菌液量：使用5 mL菌液，按比例扩大Buffer S1/S2/S3用量。
• 延长洗脱时间：Buffer EB静置延长至5分钟，或60℃预热洗脱。
• 减少剪切力：避免剧烈吹打，洗脱液低速离心（10,000 rpm）。

注意事项

• 所有离心步骤需室温（15-25℃）进行。
• 若质粒用于转染，建议用无内毒素的Buffer EB替代水洗脱。
• 提取失败时，检查菌株类型（endA+需严格去核酸酶）及试剂有效期。

通过以上优化，可显著提高难提取质粒的得率和纯度。如有特殊需求，欢迎联系技术支持。