MMLV 反转录酶

MMLV 反转录酶

产品特点

　　本产品采用大肠杆菌表达体系，是经过高度纯化的重组酶。该酶的RNA酶H活性很低，具有更高的热稳定性，广泛应用于链 cDNA 的合成，反转录温度高达55°C，特异性和 cDNA 产量明显提高，长度明显大于、第二代反转录酶。本产品适合于从各种组织中提取的总 RNA 或 mRNA 为模板合成 cDNA 、实时荧光定量RT-PCR、3’-和 5’-RACE 等。

它具有下列特点：

　　1. 逆转录效率高，链 cDNA 产量高；

　　2. 可合成 5 kb 的 cDNA；

　　3. 逆转录反应的模板总 RNA 范围可以在 10 ng-5 μg 之间。

使用方法

　　（注 意：总反应体积为20 μl，总RNA的量为10 ng - 5 μg，若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂RNasin）

　　1. 将5× RT Buffer和M-MLV 反转录酶溶解并置于冰上备用，准备好RNA模板、引物（oligo dT，随机引物，或者二者的Primer Mix、或者特异性引物），dNTPMix、DEPC-ddH2O等。

　　2. 在无 RNase的PCR管中加入引物，总 RNA (10 ng - 5 μg)或mRNA(1 - 500 ng)，4μldNTP (2.5 mM each)，4 μl 5 × RT Buffer，1 μl M-MLV 反转录酶，补足DEPC-ddH2O至 20 μl。

　　3. 振荡混匀，离心数秒使反应液聚集于 PCR 管底部。

　　4. 42℃保温 15-60 min。85℃孵育 5min，反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

　　5. 该产物可直接用于第二链的合成或 RT- PCR 扩增反应，保存请置于-20℃。