Pfu DNA Polymerase含预混Mg2+的10xPfu Buffer

Pfu DNA Polymerase(含预混Mg2+的10xPfu Buffer)

产品特点

　　Pfu DNA Ploymerase 是从克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为 90kD。该酶具有3’→5’核酸外切酶活性，能纠正 DNA 扩增过程中产生的错配，是目前已发现的所有耐热DNAPolymerase中出错率的。

　　该酶无 5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/min，比 Taq DNA Ploymerase 要低。该酶热稳定性更好，95℃1 小时仍保持90%以上的活性，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。使用该酶进行 PCR 扩增得到的产物为平末端，不能直接用 TA 载体克隆。

使用方法

　　（注 意：以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、

　　引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化）

注 意：

　　A 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可 提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

　　B 镁离子浓度请以终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板 来调节镁离子浓度，由此优化反应体系）

注 意：

　　Ａ 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

　　b 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Taq DNA Polymerase的扩增效率为 1 kb/60 sec。

　　C 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数）

3. 结果检测：

　　反应结束后取 5 μl 反应产物，加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。