双链DNAdsDNA浓度测定试剂盒荧光法

　　双链DNAdsDNA浓度测定试剂盒荧光法

　　产品及特点

　　dsDNA HS Assay Kit 是一种简便、灵敏、的双链 DNA（dsDNA)荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 dsDNA 标准品。本试剂盒对 dsDNA具有高度选择性，在 0.2~100ng 区间具有很好的线性关系，是一种快速、简单、灵敏的DNA 定量方法。本试剂盒操作简单方便，使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液，然后加入待测 dsDNA 样品，即可使用荧光酶标仪或 Qubit®光仪进行读数。本试剂盒对一些常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。

　　保存条件

　　2-8℃避光保存，保存有效期为 6 个月，请注意避免反复冻融。

　　使用方法

　　1. 使用荧光酶标仪进行双链 DNA 定量检测分析

　　注 意：

　　① 为简便起见，以下操作说明中以 10 μl 的 dsDNA 样品为例，但是实际应用中应根据

　　dsDNA 样品的浓度选择合适的体积（一般情况下待测的 dsDNA 样品体积范围为 1~50 μl），然后调整检测工作液的体积，使整个检测体系的总量为 200 μl。

　　② 如待测样品浓度高于 100 ng/ μl，请进一步稀释样品后再进行检测，否则会影响结果的准确性。

　　1.1 在使用前，将试剂盒中的各组份放至室温。检查组份 A 是否有沉淀。若有沉淀物，可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育，并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解。1.2 制备检测工作液。取试剂盒中的组份 A，按照 1:200 的比例用组份 B 进行稀释，配制成检测工作液，现配现用。（如待测 DNA 样品共 8 个，且每个样品设置一个复孔，需取 20 μl 的组份 A 加入到 4 ml 的组份 B 中并混合均匀，制成检测工作液，备用。）

　　注意：每次配制检测工作液时要使用洁净的离心管。

　　1.3 向 96 孔酶标板中加入新鲜配制的检测工作液，每孔 190 μl。核酸定量检测试剂

　　盒使用说明书

　　（注 意：推荐使用黑色的酶标板，如 Greiner 或 Corning 公司的黑色 96 孔酶标板，可有效降低反应孔之间的荧光干扰。）

　　1.4 取试剂盒中的组份 D，按浓度梯度进行稀释，制成一系列稀释的 dsDNA 标准

　　品。（也可使用已知浓度的 DNA 样品）

　　（注 意：因须绘制标准曲线，dsDNA 标准品进行浓度梯度稀释时须至少设置 5 个梯度，且待测dsDNA 样品的浓度须介于稀释标准品的浓度区间范围内，以保证检测结果的准确性。）

　　1.5 向 96 孔酶标板中加入梯度浓度的 dsDNA 标准品或待测的 dsDNA 样品，每孔10μl，并分别设置 1-2 个复孔，加入后用移液枪轻轻地吹打混匀。

　　1.6 将酶标板至于室温环境下避光孵育 2 分钟。

　　1.7 使用荧光酶标仪检测荧光信号值，选择合适的检测波段：激发波长(Ex)设置为

　　485nm，发射波长(Em)设置为 530nm。

　　1.8 测得的梯度浓度 dsDNA 标准品的荧光信号值分别对应其浓度，绘制标准曲线；将测得的未知浓度 dsDNA 样品的荧光信号值代入标准曲线中，可计算出 dsDNA 样品的浓度。

　　2. 使用 Qubit®荧光仪进行 dsDNA 定量检测分析

　　注 意：

　　① 为简便起见，以下操作说明中以 10 μl 的 dsDNA 样品为例，但是实际应用中应根据 dsDNA 样品的浓度选择合适的体积（一般情况下待测的 dsDNA 样品体积范围为 1~50 μl），然后调整检测工作液的体积，使整个检测体系的总量为 200 μl。

　　② 如待测样品浓度高于 100 ng/μl，请进一步稀释样品后再进行检测，否则会影响结果的准确性。

　　2.1 在使用前，将试剂盒中的各组份放至室温。检查组份 A 是否有沉淀。若有沉淀物，可将该试剂至于 37℃水浴锅中温育，并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解。

　　2.2 制备检测工作液。取试剂盒中的组份 A，按照 1:200 的比例用组份 B 进行稀释，配制成检测工作液，现配现用。如待测 DNA样品共8个，且每个样品设置一个复孔，需取20 μl 的组份A加入到4 ml的组份B中并混合均匀，制成检测工作液备用。

　　2.3 向分析管中分别加入新鲜配制的检测工作液，每管 190 μl。

　　（注 意：仅可使用 0.5 ml PCR 的薄壁分析管。）

　　2.4 向分析管中加入组分 C、组分 D、或待测的 dsDNA 样本，每管 10 μl，涡旋震荡2-3 秒使充分混匀。请注意正确标记 dsDNA 标准品和待测样品的分析管。

　　2.5 将分析管至于室温环境下避光孵育 2 分钟。

　　2.6 按照 Qubit®荧光仪的操作说明，选择 dsDNA High Sensitivity 检测程序测定荧光

　　信号值

　　双链DNAdsDNA浓度测定试剂盒荧光法

　　注意事项

　　1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

　　2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

　　3. 对于检测试剂和 DNA 标准品，每次使用前要先摇匀再离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。

　　4.为保证定量结果的，请使用校准后的移液器操作。