游离DNA提取试剂盒

游离DNA提取试剂盒

产品及特点

　　本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的游离DNA，也可以用于提取外泌体携带的DNA。独特的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解游离的DNA和蛋白复合物，降解蛋白，DNA 吸附于硅基质膜上，通过快速的漂洗、离心步骤，去除杂质，得到高纯度的游离 DNA。本试剂盒操作简单、快速，所得游离 DNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于常规 PCR 和实时荧光定量 PCR 等分子生物学实验。

它具有下列特点：

　　1. 简便快速：1 小时内可获得高纯度的游离 DNA；

　　2. 安全：无需有机溶剂抽提，使用安全；

　　3. 稳定：所得 DNA 纯度高，重复性好，方便下游应用。

使用方法

　　自备试剂无水乙醇。

　　1. 向离心管（自备）中加入 20 ul Proteinase K。

　　2. 向离心管中加入 200 ul 血清、血浆或无细胞体液，再加入200 ul Buffer GL涡旋震荡充分混匀。

　　（注 意：为确保样本有效裂解，加入 Buffer GL 后，需将样本与 Buffer GL 充分混匀。）3. 56℃孵育 10 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

　　4. 加入 250 ul 无水乙醇，涡旋震荡 15 sec，室温放置 5 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

　　(注 意：如果环境温度超过 25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用)

　　5. 将一个吸附柱放入收集管中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，10,000rpm离心 1 min，弃收集管中的废液。

　　6. 向吸附柱内加入 500 ul 的 Buffer W1，室温 10,000 rpm 离心1 min，弃收集管中废液。

　　（注意：Buffer W1 中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

　　7. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer W2，室温10,000 rpm 离心1 min，弃收集管中废液。

　　（注 意： Buffer W2 按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发；如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤 7 一次。）

　　8. 室温 12,000 rpm 离心 3 min，甩干残留液体。

　　（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续使用）

　　9. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置 2 min，使吸附膜完全变干。加入 20 ~ 50 ul 的洗脱液Buffer EB，室温放置2 min。10,000 rpm 离心 2 min，离心管底溶液即游离 DNA。

　　（注 意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 ~ 8.5之间，为了增加 DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2min，再次离心收集）

注意事项

　　1. 实验前在 Buffer W1 和 Buffer W2 中按标签说明加入无水乙醇；

　　2. 如缓冲液 Buffer GL、Buffer W1 结晶或产生沉淀，可在 56℃水浴溶解；

　　3. 所有离心步骤均为室温下操作。