痰液基因组DNA提取试剂盒

　　痰液基因组DNA提取试剂盒

　　产品及特点

　　本产品适合从 1ml 液化的痰液中分离纯化总 DNA（包括基因组DNA、线粒体DNA及可能存在的细菌、病毒 DNA）。被溶解的痰液经裂解及蛋白酶K 消化后DNA将结合到纯化柱上，降解的蛋白与 PCR 抑制物则被过滤除去，DNA 经Buffer W1 和Buffer W2洗涤后，用 Buffer EB 洗脱，即可用于各种分子生物学实验。

　　它具有下列特点：

　　1. 简便快速；

　　2. 重复性好，产量高；

　　3. 完全去除污染物和抑制剂，便于下游应用。

　　使用方法

　　自备试剂

　　无水乙醇。

　　使用前准备

　　1. 如果离心机有制冷功能，请将温度设置到 25℃。

　　2. 将水浴锅温度设置到 56℃。

　　3. 根据试剂瓶标签上的指示在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。

　　DNA提取

　　1. 痰液化处理：估算痰液的体积，按痰液的 2 倍体积加入 Buffer SP，再加入200 μl BufferDT，混匀使痰液充分液化。

　　2. 取 1ml 液化的痰液加入到 1.5ml 离心管中，10000rpm 离心2 分钟，弃上清液。

　　3. 加入 200 μl Buffer GTL 和 20μl Proteinase K，旋涡振荡 15 秒混合均匀，再加入200μlBuffer GL，充分混匀，56℃水浴 10-20 分钟至溶液清亮。

　　4. 冷却至室温，加入 200ul 无水乙醇，混匀。

　　5. 将一个离心吸附柱放入收集管中，将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附柱中，12,000 rpm 离心 1 min，弃收集管中的滤液。

　　6. 向吸附柱内加入 500 μl 的 Buffer W1，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。

　　（注意：按要求在 Buffer W1 中加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

　　7. 向吸附柱内加入 600 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。

　　（注 意：Buffer W2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

　　8. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心2 min，弃收集管中滤液。

　　（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用）

　　9. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，加入50 - 100 μl Buffer EB，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min，离心管底溶液即基因组DNA。

　　（注 意：为增加洗脱效率，可将洗脱液 Buffer EB 在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 - 8.5之间，为了增加回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2min，再次离心收集）

　　注意事项

　　1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解；

　　2. 所有离心步骤均为台式离心机。