培养细胞基因组DNA提取试剂盒

　　培养细胞基因组DNA提取试剂盒

　　产品特点

　　本试剂盒适用于培养细胞基因组 DNA 的提取。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系降解蛋白，结合硅胶膜特异吸附核酸的原理，可快速纯化得到高质量的基因组DNA。使用本试剂盒提取得到的基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。

　　它具有下列特点：

　　1. 简便快速，可快速获得高纯度的基因组 DNA；

　　2. 重复性好，产量高；

　　3. 完全去除污染物和抑制剂，便于下游应用。

　　使用方法

　　自备试剂

　　无水乙醇、RNase A（可选）。

　　（注 意：Buffer W1 和 Buffer W2 为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

　　1. 材料处理：

　　a. 如提取材料为悬浮培养细胞，离心后弃上清，加入 200 μl Buffer GTL 缓冲液，振荡至彻底悬浮。

　　b. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000 rpm(-11,200×g)离心1 min，倒尽上清，加 200 μl 缓冲液 Buffer GTL，振荡至彻底悬浮。

　　（注 意：如果需要去除 RNA，可加入 4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客户自备），振荡15 sec，室温放置 5 min。）

　　2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液，充分混匀。

　　3. 加入 200 μl Buffer GL，充分混匀，56℃水浴或金属浴处理10 min，期间每隔一段时间震荡离心管，溶液变得清亮后短暂离心，以去除管盖内壁的水珠。

　　4. 加入 200 μl 无水乙醇，充分震荡，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。

　　5. 将所得溶液和絮状沉淀转移到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中的滤液。

　　6. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W1，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。（注 意：Buffer W1为浓缩液按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

　　7. 向吸附柱内加入 600 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。（注 意：Buffer W2 为浓缩液按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

　　8. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W2，室温 12,000 rpm 离心30 sec，弃收集管中滤液。9. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留漂洗液。

　　（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）

　　10. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管（自备）中，加入50 - 100 μl Buffer EB，室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min，离心管底溶液即基因组DNA。

　　（注 意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在 7.0 - 8.5 之间，为了增加基因组 DNA 回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集）

　　注意事项

　　1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解。

　　2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA小，提取量下降。

　　3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。