SPEEDYPURE快速质粒小提试剂盒

　　SPEEDYPURE快速质粒小提试剂盒

　　产品及特点

　　本试剂盒用于质粒 DNA 的小量快速制备。在经典碱裂解法提取质粒的基础上进行改 进优化，可视化操作，可在 10 min 之内完成提取任务，大大降低了提取时间。质粒可从 菌体中快速释放，并特异、高效地被离心吸附柱吸附。所得质粒可直接用于酶切、转化、 PCR 、实时荧光定量，测序等各种分子生物学实验。

　　它具有下列特点：

　　1. 快捷、高效：可视化操作，简便高效，节约时间；

　　2. 纯度高：沉淀致密，去杂干净。

　　保存条件

　　在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存 12 个月；更长时间的保存可置于 2-8℃ 。若溶 液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 应置于 2-8℃ 保存，可稳定保存 6 个月。

　　使用方法

　　1. 取1- 4 ml 过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min ，尽量将上清去除干净。

　　（注 意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取 1.5 ml 菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）

　　2. 加入 200 μl Buffer S1 ，旋涡震荡或用移液器充分吹打使菌体重悬均匀，呈现出均匀混 浊的棕红色。

　　（注 意：菌体沉淀一定要悬浮均匀，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）

　　3. 加入 200 μl Buffer S2 ，温和颠倒混匀使菌体完全裂解，直到溶液变成清亮、粘稠的紫红色。

　　（注 意：不可剧烈震荡， 以免造成基因组 DNA的污染）

　　4. 加入 350 μl Buffer S5 ，立即温和颠倒混匀，可见红黄相间的沉淀物产生，继续混匀直到完全变为黄色，然后 12,000 rpm离心3 min。

　　（注 意：Buffer S5 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀，如果上清中还有紫色漂浮物，说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色）

　　5. 小心将上清液转移到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心30 sec ，弃收集管中滤液。

　　6. 加入 600 μl Buffer W2 ，室温 12,000 rpm 离心30sec，弃收集管中滤液。

　　（注 意：Buffer W2为浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后应立即盖紧瓶盖，以防酒精挥发）

　　7. 干燥。将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min ，甩干残留漂洗液。

　　（注 意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）

　　8. 将吸附柱置于一新的无菌 1.5 ml 离心管（自备）中，加入 50 - 100 μl 的洗脱液Buffer EB， 室温 12,000 rpm 离心 1 min ，离心管底溶液即质粒 DNA。

　　注意事项

　　1. 细菌培养时间一般为 12 - 16 小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质 粒质量甚至导致质粒 DNA 突变。

　　2. 每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S5 是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。

　　3. 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关，一般1.5 ml 过 夜培养菌体可收获约 10μg 高拷贝质粒。